Studentská vědecká konference

Alprazolam je léčivá látka ze skupiny benzodiazepinů obsažená v léčivých přípravcích Xanax, které jsou jedním z nejčastěji předepisovaným anxiolytikem z této skupiny. V České republice podobně jako v dalších zemích Evropské unie je tento lék k dostání pouze na lékařský předpis. Vlivem častého zneužívaní tohoto léku je mimo oficiální distribuci dostupné velké množství těchto léků, často padělků. Tyto léky bud' obsahují alprazolam, ale ne v deklarovaném množství, nebo mohou obsahovat i jiný benzodiazepin. Cílem této práce je analýza tablet Xanaxu zakoupených na internetu a zjištění, zda jde o padělek. Nejprve byly zkoumány fyzikální vlastnosti tablet (vzhled, rozměr, hmotnost). Poté byly tablety rozpuštěny v methanolu a analyzovány pomocí LC/Q-TOF-MS, což umožnuje určit přesnou hmotu léčivé látky. Získaná spektra účinné látky byla porovnaná s knihovními spektry alprazolamu. Celkem bylo analyzováno 10 vzorků – 4 originály a 6 pravděpodobných padělků. V případě 4 originálů a 2 padělků byl nalezen alprazolam, ve 3 případech byl nalezen jiný benzodiazepin, pravděpodobně etizolam, v jednom případě nebyla nalezena žádná účinná látka. Dalším krokem bude identifikace etizolamu porovnáním spekter se standardem a kvantifikace benzodiazepinů obsažených v léčivých přípravcích.

V posledních letech se stále rychleji rozvíjí trh s novými syntetickými kanabinoidy (NSK). Ty často nepodléhají kontrole jako omamné a psychotropní látky (OPS), neboť obchází legislativní opatření obměnou struktury již existujících nelegálních OPS. Účinky NSK na lidské zdraví nejsou dodnes zcela známé, avšak zaznamenané případy masových otrav, někdy i se smrtelnými následky, jasně poukazují na zdravotní rizika spojená s jejich užíváním. Cílem práce bylo vyvinout moderní metodiku pro detekci a kvantitativní stanovení kanabinoidů AB-PINACA, 5F-ADB  a 5F-PB-22 navázaných na damiánu po vzoru prodávaných bylinných kuřáckých směsí. Studie byla vedena 2 směry – volba vhodného rozpouštědla pro extrakci NSK a tvorba kalibračního modelu. AB-PINACA byla navázána na damiánu a extrahována do 10 rozpouštědel. Extrakty byly studovány infračervenou spektroskopií a získaná data byla porovnávána se spektry damiány, rozpouštědel a NSK. Na získaný soubor dat byla aplikována analýza hlavních komponent, z níž vyplynulo, že nejvhodnějším rozpouštědlem je ethanol. Koncentrační série všech studovaných NSK byly proměřeny po jejich extrakci z damiány do ethanolu. Jednotlivé kalibrační modely založené na odečtu plochy vybraných charakteristických pásů kanabinoidů dosahují vysokých hodnot spolehlivosti.  

Konopí seté obsahuje velké množství biologicky aktivních látek. Nejznámější jsou fytokanabinoidy, z nichž například Δ⁹-tetrahydrokanabinol (Δ⁹-THC) vykazuje psychoaktivní účinky a kanabidiol (CBD) účinky léčebné. Nejčastěji jsou pro léčbu používány konopné masti a oleje. S jejich vzrůstající popularitou stoupá potřeba spolehlivé analytické metody pro stanovení fytokanabinoidů v konečném produktu. Cílem práce je vyvinout HPLC-MS metodu, která by stanovila obsah vybraných fytokanabinoidů (Δ⁹-THC, CBD, CBDA, Δ⁸-THC, THCA, CBG, CBGA, CBN a CBDV) v konopných mastech a olejích. Ty se však vyznačují rozmanitým chemickým složením. Z tohoto důvodu musel být nejprve optimalizován postup pro zpracování a extrakci vzorku. Při hledání nejvhodnějšího rozpouštědla bylo zjištěno, že se masti a oleje nejlépe rozpouští ve směsi rozpouštědel isopropanol + ethylacetát v poměru 1:1. Chromatografická analýza probíhala na koloně Poroshell 120 EC-C18 a detekce byla  provedena pomocí tandemové hmotnostní spektrometrie s ionizací elektrosprejem. Následně byla metoda validována, což zahrnovalo určení matričního efektu, výtěžnosti, selektivity, linearity, limitů detekce a kvantifikace. Celý postup se nyní bude aplikovat na vybrané masti a oleje s obsahem konopí, které jsou dostupné na trhu v České republice.  

Analýzy endogenních steroidů se v biochemických laboratořích provádí imunoanalytickými metodami (CLIA, RIA, EIA). V posledních letech jsou na vzestupu metody chromatografické spojené s hmotnostní detekcí kvůli jejich vyšší citlivosti a možnosti analyzovat několik hormonů zároveň. Cílem této práce je vyvinout LC/MS metodu pro stanovení vybraných endogenních steroidů (kortisonu, kortisolu, 11-deoxykortikosteronu, dehydroepiandrosteronu, epitestosteronu, testosteronu) a porovnat jejich množství ve venózní krvi, malém množství venózní krve, kapilární krvi a slinách. Proteiny byly ve vzorku vysráženy acetonitrilem. Centrifugací získaný supernatant byl využit pro stanovení steroidů ve vzorcích 11 dobrovolníků. Z toho byl nejméně invazivní odběr slin. Simultánně lze stanovit všechny vybrané steroidy metodou HPLC/MS z objemu 250 μl séra venózní krve. Ten lze snížit až na 50 μl séra pro stanovení kortizonu, kortizolu, testosteronu a dehydroepiandrosteronu. Z kapilární krve je možné u mužů, oproti ženám, analyzovat testosteron. Epitestosteron byl stanoven pouze z 250 μl séra venózní krve a slin, 11-deoxykortikosteron lze stanovit jen z 250 μl séra venózní krve.  

Serotonergní halucinogeny jsou látky s psychoaktivním účinkem, mezi které lze zařadit fenylalkylaminy, odvozené od aminokyseliny fenylalaninu, a indolalkylaminy, odvozené od aminokyseliny tryptofanu. Specifický vliv těchto látek na vnímaní a myšlení člověka je od nepaměti využíván při domorodých a náboženských rituálech, a dnes jsou tyto látky hojně zneužívány jako rekreační drogy. To je případ i přírodního indolmonoaminu 5-MeO-DMT, který je produkován řadou rostlin i živočichů, především některými druhy žab. Z rizika zneužívání a relativně snadné dostupnosti halucinogenů plyne nutnost získat relevantní data a podrobně popsat metabolismus těchto látek. K tomu je zapotřebí přesná a spolehlivá metoda analýzy a vhodná úprava biologických vzorků. Vývoj metody a optimalizace přípravy biologických vzorků je součástí prezentované studie, jež je zaměřena na identifikaci metabolitů 5-MeO-DMT ve vzorcích lidské moči, získané od dobrovolníků, pomocí LC-HRMS. V rámci vývoje metody byla porovnávána odezva HRMS detektoru pro dané analyty při použití devíti rozdílných mobilních fází a dvou chromatografických kolon.

Nelegální užívání syntetických anabolických androgenních steroidů k zvýšení fyzické kondice a objemu svalové hmoty s sebou přináší i velmi negativní působení na lidský organismus. Vedle vážných fyziologických nežádoucích účinků se objevují i psychologické. Většina uživatelů AAS však nežádoucí účinky pomíjí, ať už se jedná o amatérské kulturisty či profesionální sportovce. V souvislosti s výše zmíněnými důvody, jsou AAS uvedeny na seznamu zakázaných látek ve sportu. Proto je zapotřebí umět analyticky detekovat zneužívání těchto látek, a to i na nízkých koncentračních hladinách ve složitých biologických matricích. Cílem této případové studie bylo potvrdit či vyvrátit přítomnost anabolických steroidů (testosteronu a boldenonu) v přípravcích určených pro budování svalové hmoty a lidském séru potenciálního uživatele AAS pomocí LC-MS/MS.

Neurosteroidy jsou steroidy, které vznikají v mozku, kde mají také nejvyšší koncentraci, ale krví jsou transportovány do celého těla. Stanovení neurosteroidů v lidském séru je velice důležité pro diagnostiku některých onemocnění, například Alzheimerova choroba nebo schizofrenie, ale zároveň velmi obtížné. V případě HPLC/MS stanovení těchto látek komplikuje detekci fakt, že tyto látky obtížně ionizují. Pro snadnější ionizaci a tím i detekci neurosteroidů v HPLC/MS analýze se používají derivatizační činidla. Cílem této práce bylo vyzkoušet různá derivatizační činidla, vyvinout metodu pro hmotnostní detekci derivatizovaných neurosteroidů a použít tuto metodu pro analýzu neurosteroidy obohacenou matrici hovězího séra pomocí HPLC/MS. Celkem byla testována tři derivatizační činidla - Amplifex Keto Reagent a 1-amino-4-methylpiperazin derivatizující keto skupinu a dansyl chlorid používaný na derivatizaci hydroxylové skupiny.  Podařilo se připravit deriváty všech neurosteroidů s keto skupinou. V případě derivatizace dansyl chloridem se podařilo připravit deriváty jen s β-estradiolem. Nejlepších výsledků bylo dosaženo s derivatizačním činidlem Amplifex Keto Reagent Kit, kde se podařilo zlepšit detekční limit pro androsteron, allopregnanolon, pregnenolon a 17-hydroxypregnenolon.