|
9:00
|
Bc.
Jakub
Papík
|
M2
|
Ing. Iva Pichová, CSc.
|
Analýza obsahu vakuol a lipidových tělísek kvasinek Candida albicans a Saccharomyces cerevisiae pomocí Ramanovy spektroskopie
|
detail
Analýza obsahu vakuol a lipidových tělísek kvasinek Candida albicans a Saccharomyces cerevisiae pomocí Ramanovy spektroskopie
Candida albicans je oportunně patogenní kvasinka, která je běžnou součástí mikroflóry zdravého člověka. V případě oslabení imunitního systému může způsobit infekce nazývané kandidózy. C. albicans je díky flexibilnímu metabolismu schopná přežívat za nepříznivých nutričních podmínek a odolávat stresům, kterým je vystavena v hostitelském prostředí. Důležitou roli v těchto procesech hrají zásobní buněčné kompartmenty kandid: vakuoly a lipidová tělíska.
Pomocí Ramanovy mikrospektroskopie jsme porovnali chemické složení vakuol a lipidových tělísek dvou příbuzných kvasinek: Saccharomyces cerevisiae a C. albicans. Kvasinky byly kultivovány buď v médiu bohatém na dusík, nebo za nedostatku dusíku.
Z Ramanových spekter jsme zjistili, že nedostatek dusíku způsobil pokles množství fekosterolu a episterolu v lipidových tělískách obou druhů kvasinek, a měl za následek také zvýšenou syntézu mastných kyselin a triacylglycerolů u S. cerevisiae. V Ramanových spektrech vakuol byl identifikován polyfosfát jako vakuolární marker. Zatímco u S. cerevisiae se jeho množství po hladovění nijak dramaticky nezvýšilo, u C. albicans vzrostlo množství polyfosfátu dvojnásobně.
Naše výsledky ukazují, že S. cerevisiae a C. albicans využívají rozdílné strategie pro přežití v případě nedostatku dusíku.
|
|
9:00
|
Bc.
Kristina
Brhlová
|
M2
|
Ing. Barbora Holubová, Ph.D.
|
Vývoj imunochemických metod pro detekci zástupců kathinonů a aminoindanů
|
detail
Vývoj imunochemických metod pro detekci zástupců kathinonů a aminoindanů
Člověk je schopen pro své tělesné a materiální potřeby překračovat hranice legislativy i zdravého rozumu. A to i přes riziko ztráty profesních a osobních vztahů nebo trvalého poškození zdraví. Jiné to není v případě užívání nových syntetických drog, které jsou vyráběny jako analoga již zakázaných drog. Nově a zpravidla domácky vyráběné substance nejsou zcela prozkoumány. Často u nich nejsou zjištěny krátkodobé ani dlouhodobé nežádoucí účinky. Proto představují mnohem větší riziko, o kterém uživatel nemusí mít tušení. Přesto jsou atraktivní alternativou díky své snadné dostupnosti, nižší ceně a dočasné bezúhonnosti. Studium struktury, metabolismu a detekce těchto látek je tedy zásadní informací pro legislativní orgány, které mají za cíl bezpečnost a zdraví celé společnosti.
Příkladem alarmující situace drogového trhu je bufedron a 5-iodo-2-aminoindan. Cílem této práce je vyvinout detekční imunochemické metody, které budou rychlé, levné a uživatelsky přístupné. Pro vývoj detekční metody ELISA byly vybrány vhodné imobilizační konjugáty, protilátky, pufry a další potřebné podmínky. Dále byla testována křížová reaktivita. Metoda byla sestavena pro 5-iodo-2-aminoindan. Ze sestavené kalibrační křivky byl určen detekční limit 93 ± 10 pg.ml-1 a další parametry metody.
|
|
9:00
|
Bc.
Monika
Kalousková
|
M2
|
Ing. Barbora Holubová, Ph.D.
|
Vývoj imunochemické metody pro detekci syntetické drogy pyrovaleronu
|
detail
Vývoj imunochemické metody pro detekci syntetické drogy pyrovaleronu
Nové syntetické drogy mají velmi podobný psychoaktivní účinek jako nelegální drogy. Tyto látky jsou syntetizovány za účelem obejít stávající legislativu – jejich struktura je velmi podobná nelegálním drogám s nepatrnými změnami. Předmětem této studie je vývoj rychlé imunochemické metody pro detekci pyrovaleronu (zástupce syntetických kathinonů). Doposud nebyla vynalezena pro tuto drogu žádná snadná a rychlá screeningová metoda, která by mohla pomoci odhalit tuto látku v oblastech jako je lékařství a policie.
Cílem práce je vyvinout nepřímý kompetitivní formát ELISA pro detekci pyrovaleronu. Na základě sestavených titračních křivek pomocí 4 králičích polyklonálních protilátek a dvou imobilizačních konjugátů (RJ3-BSA a RJ3-RSA) byla vybrána přijatelná kombinace protilátky (Pl 298, 2,5 μg/ml) a konjugátu (RJ3-BSA, 50 ng/ml) a sestavena kalibrační křivka. V dalších experimentech byly vybírány příhodné podmínky metody (různé složení pufrů pro protilátky, teplota a doba inkubací). S optimalizovanou metodou bylo dosaženo I50 0,30 ± 0,08 ng/ml.
V navazující práci bude testována specifita použité protilátky v ELISA pomocí křížových interakcí.
|
|
9:00
|
Bc.
Anna
Stellnerová
|
M2
|
Ing. Ludmila Karamonová, Ph.D.
|
Sestavení a charakterizace multianalytového imunotestu pro klasické stafylokokové enterotoxiny
|
detail
Sestavení a charakterizace multianalytového imunotestu pro klasické stafylokokové enterotoxiny
Stafylokokové enterotoxiny jsou proteiny produkované bakteriálním patogenem Staphylococcus aureus, který je běžným kolonizátorem kůže a sliznic. Ačkoliv je lidský organismus vůči stafylokokové infekci odolný, při oslabení imunity může způsobit různě závažná onemocnění. Kontaminace potravin stafylokokovými enterotoxiny ovlivňuje jejich zdravotní nezávadnost, a proto je nutné vyvíjet rychlé metody pro jejich detekci.
Dosud byly pro jednotlivé klasické stafylokokové enterotoxiny vyvinuty imunochromatografické testy (ICT) za nejvýhodnějších podmínek pro každý z nich. Cílem této práce bylo sjednocení podmínek a vývoj jednotného multianalytového testu. Nejdříve bylo nutné ověřit funkčnost a detekční limity jednotlivých ICT v otevřeném formátu. V průběhu práce byl sestaven a charakterizován multitest, který byl následně převeden do uzavřeného formátu. Dále budou vybrány vhodné podmínky pro uzavřený formát a test bude ověřen na vzorcích mléčných produktů. Vyvíjený multianalytový test by měl mít schopnost detekovat testované analyty v hodnotách ng.ml-1, a měl by být vhodný pro využití přímo v terénu.
|
|
9:00
|
Bc.
Ondřej
Novotný
|
M2
|
doc. Ing. Mgr. Štěpánka Kučková, Ph.D.
|
Rozlišení mléčných materiálů používaných v historických objektech pomocí hmotnostní spektrometrie
|
detail
Rozlišení mléčných materiálů používaných v historických objektech pomocí hmotnostní spektrometrie
Malta je stavební materiál tvořený v základu plnivem, pojivem a vodou. Kvůli zlepšení vlastností malty se, hlavně v závislosti na zeměpisné oblasti a na dostupném materiálu, v průběhu historie používala aditiva (přídavky do 5 % celkové hmotnosti) jako krev, rýžový škrob, vajíčka nebo mléko. V průběhu času se ale přesná technologie přípravy malty nedochovala a dnes syntetické náhražky aditiv nedosahují takové životnosti, nebo kvality, jakou se vyznačují dochované vzorky. Tato práce se zabývá rozlišením proteinů z mléčných aditiv přidávaných do malt. Štěpením pomocí enzymu trypsinu a následným měřením izolovaných peptidů na přístroji MALDI-TOF se pokoušíme analýzou hlavních komponent (PCA) rozlišit od sebe jednotlivá mléčná aditiva, v našem případě plné mléko, kasein, tvaroh a syrovátku. Z důvodu nespecifického štěpení a degradace proteinů, způsobeném alkalickým prostředím v maltě, povětrnostními podmínkami a stárnutím, zkoumáme rozlišení proteinů v referenčních materiálech, v modelových maltách z referenčních materiálů a s reálnými historickými vzorky. Dosavadní výsledky prokázaly možnost spolehlivého rozlišení referenčních materiálů a podobné výsledky očekáváme i u porovnání modelových a historických malt.
|
|
9:00
|
Bc.
Alžběta
Kropáčková
|
M2
|
MUDr. Ivan Šebesta, CSc.
|
Stanovení thyreoidálních hormonů na systému LC-MS/MS
|
detail
Stanovení thyreoidálních hormonů na systému LC-MS/MS
Stanovení hladiny tyreoidálních hormonů je důležitým diagnostickým nástrojem pro odhalení chorob štítné žlázy. V současné době se pro rutinní analýzu v laboratořích klinické biochemie využívají imunochemické automatické analyzátory s převážně chemiluminiscenční detekcí.
Za zlatý standard je ale považována selektivní a specifická metoda LC/MS/MS, která v porovnání s imunoanalytickými metodami nabízí řadu výhod, např. možnost stanovení více analytů současně během jedné analýzy nebo vyloučení zkřížené reakce s používanými protilátkami jako u imunoanalýzy. To LC/MS/MS metodu upřednostňuje zvlášť při vyšetření štítné žlázy v těhotenství, kde dochází k změnám v hladinách vazebných proteinů oproti běžné populaci.
Pomocí LC/MS/MS byly stanoveny hormony tyroxin (T4) a trijodtyronin (T3) ve volné i vázané formě ze séra pacientů. Před vlastním stanovením bylo nutné provést ultrafiltraci a extrakci analytů z matrice. Pro analýzu byl využit přístroj Agilent 6490 Triple Quadrupole LC/MS systém s analytickou kolonou Agilent Poroshell 120 EC-C18. Při tomto postupu nebylo dosaženo dostatečné citlivosti pro detekci volných tyreoidálních hormonů. LOD se pohyboval okolo 40 pmol/l. Dostatečnou citlivosti by mohla poskytnout metoda 2D-LC/MS/MS spojená s SPE, která je v současnosti testována.
|
|
9:00
|
Bc.
Miroslava
Hanžlová
|
M2
|
MUDr. Ivan Šebesta, CSc.
|
Stanovení steroidních hormonů na systému LC-MS/MS
|
detail
Stanovení steroidních hormonů na systému LC-MS/MS
Steroidní hormony jsou lipofilní signální látky, které jsou syntetizovány ve steroidogenních žlázových buňkách kůry nadledvin a pohlavních žláz. V současnosti je popsáno mnoho poruch funkce těchto endokrinních žláz. Pro detailní diagnostiku je důležité stanovení hladin hormonů a prohormonů, které se liší od zdravé populace. Analýza steroidních hormonů má však svá specifika, která spočívají zejména v jejich nízkých koncentracích v krevním séru a existenci pouze velmi malých strukturních rozdílů mezi jednotlivými hormony. Cílem práce bylo navrhnout metodu stanovení steroidních hormonů pomocí kapalinové chromatografie ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC-MS/MS) a porovnat ji s rutinně používanými imunoanalytickými metodami. Pomocí LC-MS/MS jsme nyní během jedné analýzy schopni stanovit 13 steroidních hormonů. Podařilo se prokázat, že mobilní fáze (MF) s přídavkem fluoridu amonného je v porovnání s běžně používanou MF s přídavkem mravenčanu amonného vhodnější pro měření a poskytuje vyšší odezvu detektoru. V současnosti vlastní analýze předchází dvoustupňová extrakce kapalina-kapalina, která by měla být do budoucna nahrazena metodou dvourozměrné (2D) LC-MS/MS bez extrakčního kroku. To by zkrátilo celkovou dobu analýzy a usnadnilo zařazení metody do klinické praxe.
|
|
9:00
|
Bc.
Daniela
Španková
|
M2
|
Ing. Holubová Barbora, Ph.D.
|
Vývoj multianalytové ELISA pro detekci vybraných syntetických drog
|
detail
Vývoj multianalytové ELISA pro detekci vybraných syntetických drog
Problémem dnešní doby je nadměrná produkce nových psychoaktivních látek (NPS), která se vymyká legislativní kontrole. NPS jsou syntetické a rostlinné substance s různým účinkem. Informace o toxicitě a účincích jsou nedostatečné a jsou spojené s vysokou úmrtností. Vysoká poptávka po metodách s rychlou a finančně nenáročnou analýzou rozsáhlého množství vzorků není překvapující. Mezi hlavní skupiny patří např. syntetické kanabinoidy, fenetytyaminy a tryptaminy, kterými se tato práce zabývá. Cílem práce je sestavení multiplexní ELISA, tak aby se pomocí jedné analýzy dal otestovat vzorek na širší skupině analytů, a to zejména na základě strukturní variability námi sledovaných syntetických drog. Pro sestavení metody se používá nepřímý kompetitivní formát ELISA na mikrotitrační desce. Prvním krokem práce bylo sestavení titračních křivek (DIPT,2C-B a pravadolin), z kterých proběhl výběr čtyř kombinací protilátek s imobilizačním konjugátem pro jednotlivé drogy. Poté byly sestaveny kalibrační křivky a vhodné podmínky pro jednotlivé imunochemické formáty (koncentrace konjugátu s koncentrací protilátky, složení reakčního pufru). Dále byly protilátky smíchány a použity pro sestavení kalibrační křivky pro multiplexní imunoanalýzu. Metoda byla charakterizována stanovením analytických parametrů.
|
|
9:00
|
Bc.
Anna
Šišková
|
M2
|
Ing. Hana Michova, Ph.D.
|
Vliv navržených experimentálních podmínek na výsledky kvantifikace biofilmu
|
detail
Vliv navržených experimentálních podmínek na výsledky kvantifikace biofilmu
Biofilmy jsou mikrobiální společenství obklopující se matricí složenou převážně z exopolysacharidů, lipidů, bílkovin a extracelulární DNA. Biofilm je zpravidla přichycen k pevnému podkladu biotického či abiotického charakteru.
Existuje celá řada metod pro kvantifikaci biofilmů, avšak nejpoužívanější je semikvantitativní metoda barvení biofilmu krystalovou violetí. V současné době se postup této metody mezi jednotlivými laboratořemi značně liší, čímž není možné výsledky jednotlivých měření porovnávat a vyhodnocovat. Hlavním cílem práce bylo proměřit a statisticky vyhodnotit 256 kombinací 4 nejčastěji používaných parametrů metody barvení biofilmu krystalovou violetí, aby se zjistilo, která kombinace poskytuje konstantní a reprodukovatelné výsledky. Jako modelový organismus byl použit kmen Staphylococcus aureus. Data naměřená pomocí barvení krystalovou violetí budou dále porovnána s hodnotami získanými z obrazové analýzy dat naměřených konfokálním mikroskopem s rotujícím diskem. Výsledkem této diplomové práce by měl být návrh standardizovaného protokolu metody barvení biofilmu krystalovou violetí. Rozšíření tohoto protokolu mezi laboratoře by umožnilo sběr a hlubší analýzu velkého množství dat, která by mohla dále objasnit mechanismy tvorby biofilmu jednotlivých mikroorganismů.
|
