|
---
|
Bc.
Petra
Kamenská
|
M2
|
doc. Ing. Barbora Holubová, Ph.D.
|
Imunochromatografická detekce testosteronu
|
detail
Imunochromatografická detekce testosteronu
Testosterón a jeho syntetické deriváty, nazývané ako anabolicko-androgénne steroidy, tvoria podľa Svetovej antidopingovej agentúry každoročne približne polovicu všetkých zneužívaných látok na nelegálne dopingové účely. Problém dopingu na báze steroidov nesúvisí len s nevyrovnaným výkonom súťažiacich počas športových súťaží, ale najmä so zdravím užívateľov týchto anabolík. Cieľom tejto diplomovej práce je preto vyvinúť funkčný imunochromatografický test na detekciu testosterónu ako rýchlu, lacnú a nenáročnú alternatívu k súčasným analytickým metódam detekcie testosterónu. Na tvorbu kompetitívneho formátu imunochromatografického testu bol k dispozícii testosterón konjugovaný s proteínom a dve skupinovo špecifické protilátky. Ako prvý bol využitý konjugát testosterón-ovalbumín, ktorý neposkytoval dostatočne intenzívne testovacie línie, preto sme pristúpili na testosterón konjugovaný s králičím sérovým albumínom. Po zostavení prvotných imunochromatografických testov s novým konjugátom bol stanovený jeho vizuálny detekčný limit v stovkách ng/ml. Na zostrojenie plne funkčného imunochromatografického testu budú nasledujúce experimenty venované výberu vhodných komponentov a podmienok (typ membrány, koncentrácia zlatých nanočastíc a skupinovo špecifických protilátok, ... ).
|
|
---
|
Bc.
Anežka
Kramná
|
M1
|
prof. Ing. Tomáš Ruml, CSc.
|
Developing antibody mimetics to target cancer antigens
|
detail
Developing antibody mimetics to target cancer antigens
New methods of cancer treatment are investigated to eliminate tumor cells more effectively. Lately, antibody-drug conjugates, where a toxic molecule is linked to an antibody recognizing a cancer antigen, have been introduced. We developed synthetic antibody mimetics targeting prostate-specific membrane antigen (PSMA), called iBodies. iBodies are polymers consisting of N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide backbone bearing small molecules for visualization and binding of a target protein. We prepared series of iBodies decorated with a specific ligand of PSMA and a cytostatic drug attached to the backbone via a cleavable linker. After internalization and cleavage of the linker by lysosomal enzymes, the drug is released and stops cell proliferation. Prepared iBodies bind to the cells as determined by flow cytometry and fluorescent microscopy. The cytotoxic effect was measured via resazurin and CellTiter-Glo viability assays on HEK293 pTet-Off A2 cells transfected with PSMA in comparison with HEK293, where iBody with or without a PSMA inhibitor was used. The specificity and the cytotoxic effect of the iBody bearing the PSMA inhibitor was observed. For further evaluation, experiments using cell lines with endogenous expression of PSMA and using other variants of iBodies will be performed.
|
|
---
|
Bc.
Fresia Esther
Arellano Herencia
|
M2
|
prof. Ing. Peter Šebo, CSc.
|
Chakterizace imunitní odpovědí na intranasální imunizaci myší antigeny původce černého kašle
|
detail
Chakterizace imunitní odpovědí na intranasální imunizaci myší antigeny původce černého kašle
Chakterizace imunitní odpovědi na intranasální imunizaci myší antigeny původce černého kašle.
Intranasální vakcinace má potenciál navodit jak slizniční, tak systémovou imunitní odpověď a může vyvolat takzvanou sterilizační imunitu, schopnou zabránit kolonizaci organismu patogenem v místě vstupu infekce. Prostup antigenů do slizniční tkáně po intranasálním podání vakcíny je zásadním faktorem pro navození slizniční imunitní odpovědí. Je omezen několika faktory, jako je epiteliální bariéra, enzymatická degradace antigenů a jejich odstraňování s hlenem takzvaným mukociliárním čištěním sliznice. Proto je při návrhu slizničních vakcín důležité použití účinného adjuvans pro navození imunitní odpovědi na sliznici. Jedním z vhodných přístupů je enkapsulace antigenů v systému nanočástic umožňujících intranasální aplikaci vakcín. Takový systém může sloužit nejen jako systém pro podávání antigenu, ale také jako vhodné adjuvans.
Cílem tohoto projektu je prověřit možnosti enkapsulace rekombinantních antigenů bakterie Bordetella pertussis (Prn, Prn-RTX908, sPrn, sPrn-RTX908, RTX908) do nanočásticových systémů trimethylchitosanu pomocí metody ionotropní gelace. Připravené experimentální částice pak budou testovány jako intranasální vakcína proti černému kašli na myších.
|
|
---
|
Bc.
Bára
Procházková
|
M2
|
Ing. Ludmila Karamonová, Ph.D.
|
Stanovení růstového hormonu a jeho fragmentů pomocí enzymové imunoanalýzy na pevné fázi
|
detail
Stanovení růstového hormonu a jeho fragmentů pomocí enzymové imunoanalýzy na pevné fázi
K zneužívání látek zvyšujících fyzickou výkonnost sportovců dochází bohužel dlouhodobě. V dnešní době však vzniká velké množství nových dopingových přípravků. Mezi ně patří i rekombinantní růstový hormon, jehož aminokyselinová sekvence je identická s hlavní izoformou endogenního růstového hormonu vylučovaného hypofýzou. Dále se čím dál častěji na trhu objevují fragmenty tohoto hormonu, které by měly mít stejné účinky na svalovou a tukovou tkáň jako kompletní růstový hormon, zároveň by však jejich užití nemělo být snadno prokazatelné. Cílem této práce je vyvinout citlivou imunoanalýzu umožňující detekci růstového hormonu a jeho fragmentů v nelegálních komerčních preparátech určených pro sportovce. Nejprve byly sledovány interakce různých protilátek s odlišnými typy imobilizovaného rekombinantního růstového hormonu. Testovány byly monoklonální i polyklonální protilátky, připravené proti celému proteinu i pouze proti epitopu obsahujícímu cílový fragment. Poté byly vybrány vhodné podmínky pro stanovení růstového hormonu a metoda byla použita pro analýzu vzorku zachyceného Policií ČR. Nově vyvinutá metoda byla schopna, na rozdíl od komerčního kitu, přítomnost růstového hormonu ve vzorku potvrdit. Dále bude vyvíjena enzymová imunoanalýza pro přímou detekci jednotlivých fragmentů.
|
|
---
|
Bc.
Radka
Mlázovská
|
M2
|
doc. Ing. Barbora Holubová, Ph.D.
|
Příprava a charakterizace komponent pro sestavení imunotestu pro detekci kortizolu a testosteronu
|
detail
Příprava a charakterizace komponent pro sestavení imunotestu pro detekci kortizolu a testosteronu
Testosteron je steroidní hormon využívaný jako anabolikum. V klinických laboratořích je analyzován metodami, které jsou časově a technicky náročné. Bylo by proto vhodné vyvinout metodu, která by zrychlila a zjednodušila detekci testosteronu ve vzorku. Dalším významným steroidním hormonem je kortizol. Jeho hladiny jsou vyšetřovány v humánních i veterinárních klinických laboratořích. Pro pacienty čekající na operaci může vést urychlení procesu detekce kortizolu ke snížení nepohodlí a stresu. Metodou splňující zmíněné požadavky může být imunochromatografický test (ICT).
Tato práce se zaměřuje na konjugáty bílkovin se steroidními hormony, které budou dále využity pro přípravu ICT. Konkrétně se jedná o konjugáty králičího sérového albuminu s kortizolem a testosteronem. Cílem byla jejich příprava a následné ověření jejich funkčnosti pomocí povrchové plasmonové rezonance (SPR). První data zpracovaná s využitím programu Origin ukazují, že dochází k interakci obou konjugátů s polyklonální protilátkou.
|
|
---
|
Bc.
Tereza
Vlasáková
|
M2
|
doc. Ing. Barbora Holubová, Ph.D.
|
Diagnostická souprava pro stanovení aldosteronu
|
detail
Diagnostická souprava pro stanovení aldosteronu
Aldosteron je steroidní hormon s významnou mineralokortikoidní aktivitou. Jeho sekrece z buněk kůry nadledvin je primárně stimulována prostřednictvím systému renin-angiotenzin-aldosteron. Aldosteron podporuje resorpci sodíku a vody v ledvinách, zároveň stimuluje sekreci vodíku a draslíku do moči. Jeho nadměrná produkce v nadledvinách vede k primárnímu aldosteronismu, jenž je spojen s vyšším tlakem. Tato příčina hypertenze je mnohem častější, než se dříve myslelo, převládá v rozmezí od 5 do 25 %. Firma Immunotech s.r.o. vyrábí diagnostickou soupravu pro stanovení aldosteronu pomocí radioimunoanalýzy. Aldosteron je měřen ve třech matricích, během inkubace probíhá kompetice mezi značeným aldosteronem a aldosteronem ve vzorku o omezený počet vazebných míst na imobilizované protilátce. Po odsátí roztoku s nenavázanými analyty se pomocí gama-čítače měří elektrické impulzy za minutu. Cílem této práce bylo zjistit výkonnostní parametry prototypu této soupravy jako jsou limity slepého vzorku, detekce a kvantifikace. Hodnota limitu kvantifikace byla stanovena na úrovni 39,9 pg.ml-1. Následně byly provedeny korelace výsledků mezi stávající verzí a aktualizovanou verzí soupravy. Pro vzorky séra a plazmy korelace splňuje daná kritéria, pro vzorky moči je potřeba provést ještě další analýzu.
|
|
---
|
Bc.
Eliška
Navrátilová
|
M2
|
Ing. Ludmila Karamonová, Ph.D.
|
Imunochemické stanovení mozkového neurotrofického faktoru a oxytocinu při testování nových metod léčby deprese
|
detail
Imunochemické stanovení mozkového neurotrofického faktoru a oxytocinu při testování nových metod léčby deprese
Depresivní porucha, častěji označována jako deprese, je vážná porucha centrálního nervového systému charakterizovaná četnými emočními, kognitivními a neuroendokrinními poruchami. Deprese narušuje schopnost „normálně“ fungovat, soustředit se i na nejjednodušší úkony, snižuje pracovní výkonnost i schopnost soustavné činnosti. Deprese totiž negativně ovlivňuje neuroplasticitu – dochází ke ztrátám dendritických trnů, synapsí atd. Nejčastějším způsobem léčby jsou klasická antidepresiva. Bohužel je stále více pacientů rezistentních ke klasické antidepresivní léčbě, a proto je nezbytné hledat alternativní medikaci. Ve spolupráci s Národním ústavem duševního zdraví v Klecanech analyzujeme účinnost alternativní léčby v podobě ketaminu a psilocybinu. Cílem této práce je kvantifikace oxytocinu a neurotrofického mozkového faktoru v krvi alternativně léčených pacientů, jelikož tyto látky odrážejí pozitivní vliv léčby na neuroplasticitu. Před samotným odběrem vzorků od pacientů bylo nutné stanovit vhodné odběrové podmínky, matrici a její zpracování a komerční ELISA kity poskytující validní hodnoty koncentrací sledovaných markerů. Bylo zjištěno, že nejvhodnější matricí pro analýzu je sérum bez přídavků inhibitorů proteas. Vhodné ELISA kity byly vybrány od firem Arbor Assays Inc. a Abcam plc.
|
